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凝胶成像概述(一)

日期:2020-09-24 12:18
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摘要:凝胶成像定义 凝胶成像即对dna/rna/蛋白质等凝胶电泳不同染色(如eb、考马氏亮蓝、银染、sybr green)及微孔板、平皿等非化学发光成像检测分析。 凝胶成像系统可以应用于分子量计算,密度扫描,密度定量, PCR定量等生物工程常规研究。
凝胶成像定义 
      凝胶成像即对dna/rna/蛋白质等凝胶电泳不同染色(如eb、考马氏亮蓝、银染、sybr green)及微孔板、平皿等非化学发光成像检测分析。
凝胶成像系统可以应用于分子量计算,密度扫描,密度定量, PCR定量等生物工程常规研究。
凝胶成像系统的原理
样品在电泳凝胶或者其他载体上的迁移率不一样,以标准品或者其他的替代标准品相比较就会对未知样品作一个定性分析。这个就是图像分析系统定性的基础。根据未知样品在图谱中的位置可以对其作定性分析,就可以确定它的成份和性质。
样品对投射或者反射光有部分的吸取,从而照相所得到的图像上面的样品条带的光密度就会有差异。光密度于样品的浓度或者质量成线性关系。根据未知样品的光密度,通过于已知浓度的样品条带的光密度指相比较就可以得到未知样品的浓度或者质量。这就是图像分析系统定量的基础。采用*新技术的紫外透射光源和白光透射光源使光的分布更加均匀,*大限度的消除了光密度不均造成的对结果的影响。
凝胶成像应用范围
总体上来说凝胶成像可应用于:凝胶成像系统可以用于:蛋白质、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分离纯化结果作定性分析
(1)分子量定量
对于一般常用的DNA胶片,利用分子量定量功能,通过对胶上DNA Marker条带的已知分子量注释,自动生成拟合曲线,并以它衡量得到未知条带的分子量。通过这种方法所得到的结果较肉眼观察估计要准确很多。
(2)密度定量
一般常用的测定DNA(脱氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)浓度的方法是紫外吸取法,但它只能测定样品中的总核苷酸浓度,而不能区分各个长度片段的浓度。利用凝胶成像系统和App,先将DNA胶片上某一已知其DNA含量的标准条带进行密度标定以后,可以方便的单击其他未知条带,根据与已知条带的密度做比较,可以得到未知DNA的含量。此方法也适用于对PA GE蛋白胶条带的浓度测定。
(3)密度扫描
在分子生物学和生物工程研究中,*常用到的是对蛋白表达产物占整个菌体蛋白的百分含量的计算。传统的方法是利用专用的密度扫描,但利用生物分析App结合现在实验室常规配备的扫描仪或者直接用白光照射的凝胶成像就能完成此项工作。
(4)PCR定量
PCR定量主要是指,如果PCR实验扩增出来的条带不是一条,那么可以利用App计算出各个条带占总体条带的相对百分数。就此功能而言,与密度扫描类似,但实际在原理上并不相同。PCR定量是对选定的几条带进行相对密度定量并计算其占总和的百分数,密度扫描时并对选择区域生成纵向扫描曲线图并积分。
凝胶成像种类
(1)普通凝胶成像分析系统:可以对蛋白电泳凝胶,DNA凝胶样品进行图象采集并进行定性和定量分析,样品包括:EB、SYBR Green、SYBR Gold、Texas Red、GelStar、Fluoroscecin、 Radiant Red等染色的核酸监测;以及Coomassie Blue、SYPRO Orange、各种染色的蛋白质凝胶如考染等。(或UV,EB和有色及可见样品成像);
(2)化学发光成像分析系统:成像范围涵盖UV,EB,化学发光、紫外-荧光、有色及可见样品成像;
(3)多色荧光成像分析系统:成像范围涵盖UV,EB,化学发光、多色荧光荧光、有色及可见样品成像;
(4)多功能活体成像分析系统:UV,EB,化学发光、多色荧光荧光、有色及可见样品成像和离体组织和小型动物,及大型型动物。
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