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PCR仪的选购

日期:2020-09-23 20:39
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摘要:

PCR的原理:

    DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶的作用下,以单链为模版,根据碱基互补配对原则复制成新的单链,与模版配对成为双链分子挎贝。在体外实验中发现,DNA在温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计与模板DNA的5’端结合的两条引物,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制,多次重复“变性解链—退火—合成延伸”的循环就可以以几何数大量扩增特定的基因。

   从PCR原理可以看出,PCR仪的关键是升降温的步骤。现在偶尔还能听到些前辈们笑谈早年的PCR实验如何在3个水浴锅中完成的趣闻。经过不断改进,今天的PCR已经越来越完善和智能化。出于市场推广的战略需要,各厂的PCR仪型号不同,着力宣传的技术指标和参数也不尽统,天呈在这里简单列出选购时大家认为应该考虑的常用指标,希翼有助于大选购PCR仪的选购技巧。

PCR仪的种类:

    PCR仪的种类总体来说可以分为两大类:PCR扩增仪和实时荧光定量PCR仪,普通的PCR扩增仪又衍生出带梯度PCR功能的梯度PCR仪、和带原位扩增功能的原位PCR仪等等。

    PCR重要的就是个升降温过程,初的水浴锅式PCR,就是三个水浴箱,个机械臂,定时抓出反应槽转换水浴锅。这种仪器体积大,迅速慢,但其实结果并不比以后的PCR仪差。后来有人利用致冷和加热做成了,固定位置升降温的PCR扩增仪。

    后来随着定量技术的发展,有企业将扩增仪和检测做成体,也就成了现在的实时荧光定量PCR仪。1996年由ABI企业先推出将扩增和检测融为体的实时荧光定量PCR仪。

PCR仪的选购:

、温度控制
    对普通PCR仪来说,温度控制主要是介质问题,理想的介质是导热性好、比热大、接触紧密的物质。温控指标主要是指温度的准确性、均匀性、以及升降温速度,对梯度PCR仪来说,除了温度的准确性和均匀性、升降温速度以外,还必须考虑仪器在梯度模式和标准模式下是否具有同样的温度特性。关于温度控制方面,编辑将在以后的技术文章里详细先容。

、仪器的功能性和人性化设计
     当然是越简单方便的设计符合用户的要求。

热盖——现在的PCR仪般均配备热盖,热盖温度设为105℃,使样品管顶部的温度达到105℃左右,蒸发的反应液就不会产生凝集在管盖上而改变反应体积,这样用户就无需再向反应管内加石蜡油,直接减少后继反应的麻烦。如果是旋转加压的热盖就要特别小心,因为压力到达时没有明显的提示,用户需要根据经验将热盖旋到合适位置,不太容易掌握。如果过松,热盖没有充分接触反应管而影响结果;如果过紧,则会导致反应管变形,甚至可能造成热盖的机械故障。新的ESP技术是指热盖加热时不接触样品管,避免加热样品管导致非特异产物,等加热到设定温度后热盖下降,将样品管压入加热模块,下降时间和压力都由电子控制。

样品基座——PCR反应多在0.2或者0.5的管子中进行,多数PCR仪也配备了不同的可更换样品槽适配不同的样品管。eppendorf有个有趣的设计,个槽内带有0.2和0.5两种不同样品孔,不需更换基座就可以分别使用两种不同的反应管,或者96孔板,加原位适配器就可以变成原位PCR了。避免了换基座的麻烦。当然不同的反应管不可以同时使用的,因为度不同,热盖不能作用。ABI的9700就可以更换不同的样品槽,样品槽系列扩增到从0.5到标准96孔,到双384孔板,分别适合不同的需要,相当灵活。

App——新的PCR仪都比较注重程序编写的简易性。大屏幕,显示实时信息,***,记忆存储多个程序、自动断电保护等都有助于实验室中的复杂环境使用。程序储存方面,有人觉得储存程序的多少似乎意义不太大,但是对于实验人员多、PCR仪每天运作频繁的实验室来说,每个使用者独立储存自定义的PCR程序,确实能方便下次的调用,会节约些时间。

    综合考虑,台PCR仪选购的关键还是在于用户自己的要求,有些功能可能都用不上或很少用,用户需要仔细斟酌,毕竟是分钱分货。

 

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